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PCB降糖片的纯化工艺及体外药效研究

来源:985论文网 添加时间:2020-05-24 14:41
摘 要
研究大孔树脂精制PCB醇提液中总黄酮,水提液中多酚、多糖的工艺条件。方法:以PCB总黄酮的总吸附率和分析率为指标,对4种完全不同的模型进行了PCB总黄酮的吸附分析力研究,确认D101是最合适的树脂。优化大孔D101树脂的纯化条件;以PCB、多糖吸附率和分析率为指标,研究了5种不同类型大孔树脂的PCB多酚和多糖的吸附和分析力,并以AB-8为理想树脂。优化大孔树脂AB-8的纯化条件。结果:PCB总黄酮的分离富集条件为:样品速度2 bv/h,样品量120.00ml,浓度4.890mg/ml,吸附1.5h,脉冲去除溶剂4%乙醇,脉冲去除速度3 bv/h,用量256.41ml多酚和多糖分离富集条件为:样品速度2 bv/h,样品量15.00ml,样品浓度0.5g/ml(药物/溶剂),吸附1.5h,40%乙醇为溶剂,洗涤速率3 bv/h,洗涤剂利用率90.0 B- 8处理后,结论:D101型大孔吸附树脂能较好的将PCB总黄酮纯化富集,AB-8型大孔树脂能较好地富集PCB多酚和多糖纯化。
关键词:PCB;降糖;纯化工艺
 
Abstract
The technological conditions of refining total flavonoids in PCB alcohol extract, polyphenols and polysaccharides in water extract by macroporous resin were studied. Methods: taking the adsorption rate and analytical rate of total flavonoids of PCB as indexes, the adsorption capacity and analytical power of four types of macroporous resins for total flavonoids of PCB were studied, and D101 was confirmed to be the most suitable resin. The purification conditions of D101 macroporous resin were optimized, and the adsorption and analytical power of PCB polyphenols and polysaccharides by five different types of macroporous resins were studied by using PCB polyphenols, polysaccharide adsorption rate and resolution as indexes, and AB-8 was used as the optimum resin. The purification conditions of AB-8 macroporous resin were optimized. Results: The separation and enrichment conditions of PCB total flavonoids were as follows: the sample concentration of 120.00 mL, was 4.890 mg/mL, the impurity removal solvent was 4% ethanol, the impurity removal rate was 3 BV/h, 60% ethanol was used as eluting solvent, the eluting rate was 3 BV/h, the amount of 125.00 mL eluent was 125.00 mL eluent, and the purity of PCB total flavonoids was 55 after D101 treatment. The separation and enrichment conditions of polyphenols and polysaccharides were as follows: the sampling rate was 2 BV/h, and the sample volume was 15.00 mL,. The sample concentration was 0.5 g/mL (crude drug / solvent), 1.5 h adsorption, 40% ethanol as eluting solvent, 3 BV/h eluent rate, 90.00 mL eluent dosage, the purity of PCB polyphenols treated with AB-8 was 10.76%, 40.92%. Conclusion: the macroporous adsorption resin D101 can purify and enrich the total flavonoids of PCB, and AB- 8 macroporous resin can purify and enrich PCB polyphenols and polysaccharides.
 
Keywords:PCB  Hypoglycemic  Purification process
 
引 言
21世纪对于人类的健康最具挑战的问题之一即糖尿病,据世界卫生组织(WHO)统计,2000年在全世界有1.7亿糖尿病的病患,按此计算比例速度上升,直至2030年,病患数会达3.6亿,并且发展中国家占有75%左右的患者。糖尿病带来的有直接和间接的巨大影响,给个体家庭和健康系统造成沉重的经济打击和社会负担[1]。糖尿病主要分为胰岛素依赖型糖尿病及非胰岛素依赖型糖尿病。治疗糖尿病途径现有西医方式、中医方式、中西医结合等方式。目前,人们尚未能彻底探知糖尿病的发病病因。并且针对糖尿病治疗的时候,西医缺乏特效药物,通常采用胰岛素、口服药物治疗、运动疗法、血糖监测以及医学营养治疗等方式进行对症治疗。中医药的研究经不断历史洗礼,由过去散在、滞后的研究发展至如今,逐渐前沿化、系统化、规范化。近些年在中医方面,在糖尿病并发症方面取得了很大的进展,其中经方的研究相当突出。与国内及国际研究相比,中医药研究仍然存在许多缺陷,需要我们在现有基础上,去提高疗效和中医研究的水平[2]
 
 
第1章 实验材料
1.1 实验药品和试剂
PCB 批号20130915浙江百草中药饮片公司
葡萄糖测定试剂盒 批号20121001上海荣盛生物药业有限公司
DMEM高糖 美国Hyclone公司
胎牛血清 Fetal Bovine Serun  FBS 美国Hyclone公司
胰蛋白酶 1:250 美国Amresco公司
PBS: 吉诺生物医药技术有限公司
青霉素和链霉素混合液 美国Hyclone公司
DMSO 美国Amresco公司
牛胰岛素 Bovine insulin INS 美国Sigma公司
3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤 IBM美国Sigma公司
地塞米松DEX) 美国Sigma公司
MTT 美国Sigma公司
无水乙醇 批号20121113 上海凌峰化学试剂有限公司
氢氧化钠 批号20130330 浙江中星化工试剂有限公司
亚硝酸钠 批号20120914 上海凌峰化学试剂有限公司
硝酸铝 批号20120523 上海凌峰化学试剂有限公司
芦丁 批号100080-200707  中国药品生物检定所
硫酸 批号20130106    浙江中星化工试剂有限公司
无水碳酸钠 批号20120701 温州市化学用料厂
D-无水葡萄糖对照品 批号110833-201205 中国食品药品检定研究院
没食子酸 批号110831-201204中国食品药品检定研究院
福林酚试剂 批号SJ0614JA14  上海源叶生物科技有限公司
大孔树脂AB-8、D101、HPD600、HPD700
 
1.2 实验器材
UV759S紫外可见分光广度计 上海精密科学仪器有限公司
FA2004电子天平 常州市幸运电子设备有限公司
HH-4数显恒温水浴锅 常州澳华仪器有限公司
TS-1脱色摇床
HC-2066高速离心机 安徽中科中佳科学仪器有限公司
飞鸽牌系列离心机 Anke 7GL-16B 上海安亭科学仪器厂
分析天平电子天平 FA2004 常州市幸运电子设备有限公
数控超声清洗器 KQ5200DE 昆山市超声仪器有限公司
飞鸽牌系列离心机 Anke 7GL-16B 上海安亭科学仪器厂
倒置荧光显微镜 OLYMPUS CKX41SF日本Nikon公司
超净工作台 SW-CJ-1F型 苏州安泰空气技术有限公司
CO2细胞培养箱 3111水套型 Thermo Electron Corporation 
TD5A-WS 台式低速离心机 湖南湘仪集团
超低温冰箱 Thermo Electron Corporation 
半自动生化仪 ANALYTECH-738PLUS
酶标仪 BIO-RAD 680
低速摇床 TS-2
BT124S 电子分析天平 Sartorius
1.3 实验动物和材料
1、细胞株
3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞。
 
第2章 方法与结果
2.1 总黄酮纯化工艺研究
2.1.1 总黄酮测定方法
(1)供试液的制备
200g PCB粗段以24:1的比例与浓度80%的乙醇三倍回流率提取,每次2小时,第一次花0.5小时渗透滤液,混合滤液浓度到4000ml,高速离心率12000 r/min,10分钟,将乙醇回收,直到乙醇没有醇味。离心1000 r/min,6分钟,放入4℃的冰箱里,避光处理,加入蒸馏水取得液体样品。
(2)标准曲线的建立
准确的称取7.02 mg的芦丁,放入10 mL 容量瓶,用浓度60%的乙醇将其稀释溶解,然后定容。精准的移取芦丁的对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 、0.8、0.9 mL置于10 mL容量瓶中,将浓度60%的乙醇加至4.0 mL,加入硝酸钠0.5ml,搅拌均匀后,静置6 min,加入0.5 mL的10%硝酸铝,振荡均匀,将其静置6 min,加入4.0 mL的4%氢氧化钠溶液,加60%浓度的乙醇到刻度,振荡均匀,静置15 min,将其高速离心,6 min离心处理,10000 r/min转速,置1 cm比色皿中,随行试剂作空白对照,波长511 nm条件下测吸光度,将浓度(C)与吸光值(A)作直线回归条件,得到线性回归方程及相关系数,得到回归方程Y=11.632X-0.0062(r 为0.9995),结果表明芦丁在14.04~63.28 μg/mL与吸光度线性良好吸收。
2.1.2 大孔树脂纯化试验
(1)吸附率、解吸率、回收率、纯度计算式
吸附率(%)=(C0-C1)/C0*100%          解吸率(%)=C2* V2/(C0-C1)* V0*100%
回收率(%)=(C2*V2)/ (C0*V0) *100%    纯度(%)=总黄酮量/干膏量*100%
C0--PCB提取液总黄酮含量;C1--吸附后滤液的总黄酮的含量;
C2--解吸后滤液总黄酮含量;V0--为上样液体积;V2--洗脱液体积
(2)大孔树脂预处理和装柱
用95%乙醇分别浸泡4种大孔树脂24 h,溶胀充分处理,将上浮杂质及碎树脂除去,之后用95%乙醇清洗以1 : 5加水稀释无乳白色现象出现为止,最后用蒸馏水淋至无醇味。然后用4%氢氧化钠(w/w)3 h浸泡,蒸馏水洗,至pH值中性后用4%盐酸(v/v)3 h浸泡,用蒸馏水洗至pH为7备用。
用湿法装柱,在装柱前加入一定量蒸馏水,然后将处理后的树脂与水一起倒入玻璃柱中,排出多余的水,保持水面在树脂层上方4厘米,避免气泡的引入,使树脂在玻璃柱中均匀分布。
(3)树脂的静态吸附实验
将4.00g经过预处理的大孔树脂置于三角瓶中,分别加17 mL同浓度PCB黄酮溶液(PCB黄酮初始浓度C0),在90 r/min转速下室温12 h振荡,吸附充分之后过滤,测定此时滤液中的总黄酮含量(C1),在30 mL 80%乙醇溶液中加入滤出的树脂,90 r/min转速下作12 h室温振荡处理,充分解吸后过滤。测定溶液总黄酮含量(C2),通过吸附率和解吸率计算确定最佳树脂结果于表1。
表.1黄酮在大孔树脂的静态吸附与解吸能力研究
树脂型号 吸附率
(%) 解析率
(%)
AB-8 86.49 78.90
D101 87.50 82.45
HPD600 87.29 73.69
HPD700 86.76 78.67
由表可知,D101大孔树脂的吸附率、解析率均大于其他三种树脂,因此选D101大孔树脂来纯化PCB的总黄酮。
2.1.3 动态吸附工艺参数的确定
(1)上样速度的考察
实验在上样总黄酮的浓度是3.647 mg/g,上样时每1管接收8.00 mL,共接收10管,考察上样流速为1、2、3、4 BV/h对总黄酮的吸附的影响,结果见图1。
 
图.1不同上样流速对吸附的影响
从图中可以看出,随着样品流速变得越来越快,渗漏率也会增加,当流速为1 BV/h和2 BV/h时,黄酮渗漏率基本相同,考虑到节省时间,样品加载流速最终确定为2 BV/h
(2)上样浓度的考察
实验在上样速度为2 BV/h,上样体积为80.00 mL,考察总黄酮浓度为4.890、3.912、3.260、2.794 mg/g对D101大孔树脂吸附的影响,结果见图2。
 
图.2不同上样浓度对吸附的影响
从图中可以看出,总黄酮的吸附率随着负载浓度的增加而增加,但进一步的浓缩会导致大量固体物质的沉淀和总黄酮的大量损失。因此,不进一步增加总黄酮的负载浓度,而是选择4.890毫克/克作为最佳负载浓度。
(3)上样量的考察(泄漏曲线)
 
图.3吸附曲线
上样溶液达一定量时出现泄漏,但大孔树脂并没有达饱和吸附,需继续上样,流出液中PCB总黄酮量逐渐递增,大孔树脂于PCB总黄酮吸附量也渐增。为控制上述数量,希望树脂尽可能吸收,考虑PCB总黄酮的损失。在120.00ml的情况下,减压液中总黄酮的总浓度约为原溶液中总黄酮总浓度的10%,泄漏点为10%,在最佳吸附条件下,大孔树脂柱的泄漏点为120.00ml。
(4)洗脱剂的考察
实验采用乙醇作为洗脱溶剂,2 BV/h洗脱剂流速下,考察各个体积分数的乙醇溶液对D101大孔树脂解析的影响,结果如图4。
 
图.4不同体积分数乙醇对回收率的影响
实验表明,60%乙醇为洗脱剂所得的总黄酮的回收率较高,因此选择60%的乙醇作洗脱剂。
(5)洗脱速度的考察
实验洗脱溶剂为60%浓度乙醇,研究洗脱速度对总黄酮解析过程的影响,见图5。
 
图.5洗脱速度对回收率的影响
如图所示,随着洗脱速度的提高,PCB黄酮的总回收率降低,随着流量的加快,导致大孔树脂和洗涤液的作用时间缩短,导致部分总黄酮不被清洗。但是,如果流速降低,冲洗时间会增加,不利于大型工业生产。总之,最终冲洗脱流速为3 BV/h。
(6)洗脱体积的考察
实验上样总黄酮的浓度为4.920 mg/g,2 BV/h的上样速度,样量为120.00 mL,60%乙醇为洗脱溶剂,脱速为3 BV/h,进行动态解析,实验结果如图6。
 
图.6洗脱液的用量
如图所示,用125.00 mL60%乙醇可以将PCB总黄酮基本解析,因此洗脱剂量选择125.00 mL。
(7)除杂溶剂的考察
实验分别采用水、4%乙醇、8%乙醇做为除杂溶剂,再用60%乙醇作为洗脱溶剂洗脱,分别得到总黄酮为432.14 mg、417.89 mg、376.719 mg,纯度分别为51.11%,53.20%,54.15%,从总黄酮得率和纯度考虑,最终选择4%的乙醇作为除杂溶剂。
(8)除杂溶剂用量的考察
选择最佳上样条件,分别采用7、9、11 BV 4%的乙醇除杂,除杂速度为3 BV/h,再用最佳解析条件洗脱,得到总黄酮分别为465.71 mg、444.61 mg、406.92 mg;纯度分别为53.34%、51.68%、49.29%。最终以7 BV为除杂剂的用量,即为256.41 mL。
2.1.4 验证性试验
为验证优选工艺的可行性,选择最佳上样条件及最佳解析条件,进行验证,结果见表2。
表.2验证试验
NO 回收率(%) 纯度(%)
1 78.845 54.764
2 79.292 55.371
3 80.281 55.612
由表可知,该工艺可行,重复性较好,回收率79.472%,纯度55.249%。
2.2 多糖、多酚纯化工艺的研究
2.2.1 PCB多糖方法学的建立
(1)供试品制备
取PCB醇提后的药渣220g(生药200g),液固比15 : 1,用水加热回流提取二次,首次1.5h,第二次为1h,混合滤液,浓缩至400ml,离心10000 r/min,5min,放入4 ℃冰箱,避光保存。加蒸馏水得上样液。
(2)标准曲线的建立
在25毫升容量瓶中放入准确称量3.35毫克葡萄糖标准物质,加水溶解至恒量,得到0.134毫克/毫升葡萄糖参考物质溶液。精确取出0.20、0.35、0.50、0.65、0.80、0.95毫升葡萄糖照射溶液,并将其放入带塞子的25毫升试管中。将水分别加入2.0毫升,加入1毫升5%苯酚溶液,然后加入5.0毫升浓硫酸,摇匀,静置20分钟,将其放入1 cm试管中,以伴随试剂为空白,测量485 nm波长下的吸光度。浓度(c)和吸光度值(a)线性回归,通过最终的线性回归方程和相关系数得到回归方程Y=53.087X-0.0037(r =0.9993)。结果表明,葡萄糖在3.3500~15.9125μg/ml范围内吸光度线性良好。
2.2.2 PCB多酚方法学的建立
(1)标准曲线的绘制
于10 mL棕色的容量瓶内准确称取5.72 mg没食子酸标准品,加水溶解,移取2.0 mL于25mL的棕色容量瓶,用水定容,即得没食子酸对照品溶液浓度为45.76 μg/mL。精密移取没食子酸照品溶液0.30、0.50、0.70、0.90、1.10、1.30 mL置于25mL棕色容量瓶中,加水到5.0mL,加0.50 mL的福林酚试剂,振摇均匀,放置8 min,加碳酸钠溶液1.50 mL20%,振荡均匀后静置1.5 h,置1cm比色皿中,随行试剂作对照,于波长760nm下测其吸光度。浓度(C)与吸光值(A)作直线回归,得线性回归方程及相关系数,得回归方程Y=100.71X+0.0047(r=0.9998),结果表明葡萄糖在1.930~8.365μg/mL与吸光度线性良好。
2.2.3 大孔树脂纯化试验
(1)吸附比率、解吸比率、回收比率、纯度计算式
吸附率(%)=(C0-C1)/C0*100%      解吸率(%)=C2*V2/(C0-C1)* V0*100%
回收率(%)=(C2*V2)/ (C0*V0) *100% 纯度(%)=(多酚+多糖)/干膏量*100%
C0--PCB提取液中多糖(多酚)含量;C1-吸附后滤液中多糖(多酚)含量;
C2--解吸后滤液多糖(多酚)含量;V0--为上样液体积;V2--洗脱液体积
(2)树脂的静态吸附实验
在三角瓶中分别准确称量4.00克预处理后的大孔树脂和40.00毫升等浓度的印刷电路板水提取液,室温下以90 r/min的转速振荡12小时,充分吸附后过滤,此时测定滤液中多糖和多酚的含量,将过滤后的树脂加入40毫升70%乙醇溶液中,室温下以90 r/min的转速振荡12小时,充分解吸过滤。测定溶液中多糖和多酚的含量,通过计算吸附速率和解吸速率确定最佳树脂结果,如表3所示。
表.3 大孔树脂对多糖、多酚的静态吸附与解吸性能研究
树脂型号 吸附率(%) 解析率(%)
多糖 多酚 多糖 多酚
AB-8 41.66 68.99 72.66 67.10
D101 42.49 68.57 62.48 66.16
HPD600 44.63 71.39 57.24 65.70
HPD700 34.25 66.47 72.08 65.02
D301 29.08 65.88 8.69 4.67
可知,AB-8的大孔树脂吸附率、解析率都较好,故选择AB-8类型大孔树脂纯化PCB水提液中多糖、多酚。
2.2.4 动态吸附工艺参数的确定
(1)上样速度的考察
实验在上样多酚、多糖浓度一定,上样体积一定,考察1、2、3、4 BV / h的上样流速对多糖、多酚吸附影响,结果见图7。
 
图.7 不同上样流速对吸附的影响
由图可知,随着上样流速的变快,泄漏率会增加,从节省时间考虑,故最终选择2 BV/h作为上样速度。
(2)上样液PH对的考察
实验在2 BV/h的上样速度下,上样体积不变,用盐酸调节PH值,分别是2、3、4、5,考察PH对于多酚、多糖的吸附率的影响,显示图8结果。
 
图.8各个pH对吸附的影响
由图可知,当上样PH为4时,出现峰值,故最终选择上样PH为4。
(3)上样浓度的考察
实验在上样速度为2 BV/h,上样体积一定,上样PH=4,考察不同药材浓度(药材/溶液)分别为0.5 g/mL、0.25 g/mL、0.17 g/mL时对AB-8大孔树脂吸附多糖、多酚的影响,结果见图9。
 
图.9不同上样浓度对吸附的影响
由图所得,随上样浓度升高,多糖、多酚吸附率升高,但进一步浓缩的话,液体流动性变差,且离心过程中多糖多酚损失提高,故最终选择上样浓度是0.5 g/mL(药材/溶液)。
(4)上样量的考察(泄漏曲线),结果见图10。
 
图.10吸附曲线
上样溶液达一定量时,则开始有泄漏,但这时大孔树脂并没有达饱和吸附,因此继续上样,当至15.00 mL上样量时,出现泄漏点,多糖、多酚泄漏率大幅度上升,故最终选择上样15.00 mL。
(5)洗脱剂的考察
实验采用的洗脱溶剂为乙醇溶液,2 BV/h洗脱流速,考察不同体积分数的乙醇对AB-8大孔树脂解析的影响,结果如图11。
 
图.11不同体积分数乙醇对解吸的影响
(6)洗脱速度的考察
实验采用40%的乙醇作为洗脱溶剂,考察洗脱速度2、3、4 BV/h对多糖、多酚解析过程的影响,结果见图12。
 
图.12洗脱速度对解析的影响
从图中可以看出,随着洗脱速度的加快,PCB多糖和多酚的解吸率呈下降趋势。对于一定量的洗脱液,随着流速的加快,洗脱液与大孔树脂的相互作用时间会缩短,导致一些多糖和多酚不能被洗脱,但流速的降低会增加洗脱时间,不利于大规模工业化生产。总之,最终选择3 BV/h作为洗脱速度。
(7)洗脱剂用量的考察
实验采用12.37毫克/克多糖浓度、3.17毫克/克多酚浓度(即药材/溶液=0.5克/毫升)、2bv/小时速度、15.00毫升样品体积、40%乙醇作为洗脱剂、3bv/小时洗脱速度进行动态分析,实验结果如图13所示。
 
图.13洗脱液的用量
由图可得,90.00 mL洗脱剂量基本完全洗脱多酚、多糖。
2.2.5验证性试验
为验证该工艺的可行性,选择最适上样条件及最适解析条件,实以验证,见表4结果。
表.4验证性试验
NO 吸附率(%) 解析率(%) 纯度(%)
(多糖+多酚)
多糖 多酚 多糖 多酚
1 99.87 99.94 95.24 93.32 51.71
2 99.66 99.87 93.80 93.40 51.26
3 99.86 99.94 94.44 94.64 51.77
由表可知,该工艺可行,重复性较好,多糖、多酚吸附率分别为99.80%、99.92%,解析率分别为94.49%、93.79%,纯度51.58%。
2.3 细胞试验
2.3.1 细胞培养
于25 cm2细胞培养板接种3T3-L1前脂肪细胞,加入正常培养液6 mL,于37 ℃,5% CO2条件下培养。
2.3.2 细胞诱导分化
将密度为5×103的3T3-L1前脂肪细胞接种在24孔培养板上,等待细胞生长接触抑制,用诱导分化液A(0.5 mmol/L IBMX,0.1 μmol/L DEX,10 mg/L INS)代替细胞培养液48小时,用诱导分化液B(10 mg/L胰岛素)代替48小时,继续更换正常培养液进行培养,每2天更换一次溶液,诱导分化6-8天,90%以上细胞呈成熟脂肪细胞表形。
2.3.3 IR模型的制备
对数生长期3T3-L1细胞计数后,将细胞连接到密度为5×103/孔的24孔培养板上,并在5% CO2、37℃和饱和湿度下培养,以抑制生长并诱导分化为成熟脂肪细胞。添加以下处理因素:
对照组继续接受常规培养液(含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液)
模型组给予1 μmolDEX正常培养液
在每个给药组的实验中使用其他细胞。
2.3.4分组与给药
初步细胞抑制率试验证明,在以下给药浓度下,细胞抑制率小于20%,即细胞存活率大于80%,可进行下一次葡萄糖利用率试验。
①. PCB醇水双提取物纯化组(高、中和低浓度:分别为100、20和4微克/毫升)
②. PCB醇水双提取物未纯化组(高、中、低浓度分别为100、20和4微克/毫升)
③阳性对照组(ROG)
④模型组
⑤正常组
2.3.5 葡萄糖消耗实验
将成熟的3T3-L1脂肪细胞分为正常培养组和模型组,模型组又分为对照组和各给药组。模型组给予1 μmol右旋糖酐48 h,然后按给药分组和浓度给药,平行放置3个平板。观察细胞形态24 h,取上清液至半自动生化分析仪检测。根据说明书测定培养液中葡萄糖的含量。结果如表5所示。
24hGLU消耗=GLU(空白培养液)-GLU(给药组上清液)
表.5给药24 h后细胞上清液中葡萄糖含量的变化
组别 浓度(mg/L) 24hGLU 消耗(x±s)
100 2.97±0.5903**
20 1.98±1.2867
4 1.50±1.0561
100 2.31±1.4440**
20 2.27±1.3370
4 1.78±0.7787
100 2.85±0.6869**
20 2.59±1.3645*
4 1.99±0.6520
1.29±0.1703#
2.40±0.6788
与正常组相比,#P<0.05;与模型组相比,*P<0.05,**P<0.01
 
第3章 结论
本文对D101大孔吸附树脂分离富集PCB总黄酮的条件进行了优化,确定了分离富集的最佳工艺条件为:加载速率2 BV/h,加载量120.00毫升,加载浓度4.890毫克/毫升,吸附时间1.5h,除杂溶剂4%乙醇,除杂速率3 BV/h,用量256.41毫升,乙醇洗脱液60%,洗脱速率3BV/h,洗脱液用量125.00毫升,纯度
通过优化AB-8大孔吸附树脂分离富集PCB多酚和多糖的条件,确定了分离富集的最佳工艺条件:进样速度为2 BV/h,进样量为15.00毫升,进样浓度为0.5g/毫升(生药/溶剂),吸附时间为1.5 h,洗脱溶剂为40%乙醇,洗脱速度为3 BV/h,洗脱剂量为90.00毫升,AB-8处理后PCB多酚和多糖的纯度为10.76%和
本课题采用生物效应法,从细胞角度探讨纯化PCB提取物与未纯化PCB的降血糖作用差异。胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要原因,脂肪组织是体内胰岛素作用的主要靶组织。大量证据表明肥胖与胰岛素抵抗高度相关。本课题所用的3T3-L1前脂肪细胞株已在国内外广泛用作经典的胰岛素抵抗模型材料。该细胞分化为脂肪细胞的方法和步骤成熟,具有生存能力强、细胞纯度高等优点。实验结果表明,纯化后的PCB提取物和未纯化后的PCB提取物能够明显或部分降低培养液中的葡萄糖含量,提高脂肪细胞葡萄糖的利用率,改善胰岛素抵抗,表明PCB提取物具有改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,提高脂肪细胞葡萄糖摄取和利用率,提高体外细胞水平胰岛素抵抗的作用。
 
参考文献
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